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蛋白提取-癌细胞-怎么提取-已经试过N种方法了但是都无济于事希望

归档日期:11-08       文本归类:单个核突击      文章编辑:爱尚语录

  蛋白提取-癌细胞-怎么提取-已经试过N种方法了,但是都无济于事,希望各位老师帮忙解决

  蛋白提取-癌细胞-怎么提取-已经试过N种方法了,但是都无济于事,希望各位老师帮忙解决

  癌细胞用作western杂交试验,可是用裂解液与RIPA的方法都没有用...

  癌细胞用作western杂交试验,可是用裂解液与RIPA的方法都没有用

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  展开全部同样方法,你用正常细胞提取没有问题吗? WB的参照能显出来?如果是WB没结果,问题不一定是蛋白的提取。

  最好是癌细胞和正常细胞同时做,如果还有hela的话,也一起,多一个参照,看是不是操作上的问题。一般动作上细致程度会影响量的多少。也要确定细胞数不能差太远。

  此外,最后加PBS或缓冲液溶蛋白时少加一点,又或者是在WB时加大上样量,看是不是量不够;或加长显影时间。

  也可以在做完电泳后,做银染直接看看。这个上样量必须足更多追问追答追问谢谢您的回答,正常的细胞这一次没有试过,但是前阶段提细胞就是用的这种方法,提取液上样跑过电泳,能出条带没有问题,提取样品经过超微量分光光度计测得结果是:20mgml,用的是RIPA方法,求解:有没有自己能配的试剂提取癌细胞的,经费不足,买不了试剂盒!!!追答你是电泳有条带,WB没有是吧?

  那就是WB的过程有问题,没转上或转过了(把转后的凝胶染色),二抗结合力不强(加长结合时间和显色时间),洗涤过度(改变时间和次数)等等。其实癌细胞和正常细胞的提取区别是没什么的。

  弄错了,是碧云天的,有好几种,你看介绍买吧!因为不知道你的是什么类型的蛋白。您好,感觉您推荐的跟我们自己配的差不多啊,除了他们多加了几种蛋白酶抑制剂以外,其他的差不多,您用过吗?我的样品是癌组织。谢谢您

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